基因沉默稳转细胞系构建

IOS技术原理介绍

基于Genloci独家专利IOS（Integration Operating System)重组技术，我们可为您提供目的基因的沉默稳定株系构建服务。我们利用IOS技术，将目的shRNA靶点定点整合到经过筛选验证过的基因组高表达活性位点中， 这些位点不仅安全（无基因），而且基因表达量更高（活跃表达位点），因此可以实现shRNA的高活性转录表达，进而对目的基因造成干扰，达到目的基因沉默的目的，并能长期稳定遗传，构建稳定细胞株系。实验周期只需（9-12周）。除此之外，我们也可以提供瞬时表达服务，构建瞬转株系。

技术原理

实验过程：

实验结果：

实验案例1

1. 构建3条shRNA载体，并筛选沉默效率最高的载体。

2. 设计特异性的Oligo。

3. 电转shRNA载体、Oligo和RP蛋白至HepG2细胞中。

4. 药杀细胞池，获得稳转细胞池。

5. 单克隆生长及Q-PCR验证（图1）。

6. 获得 定沉默的HepG2细胞株。

图1：Q-PCR检测不同克隆株目的基因表达情况

技术优势

目的基因沉默是研究基因功能常用的手段之一。Genloci拥有的独家 IOS 专利技术可以快速、高效的将 shRNA 整合到细胞的基因组中，实现目的基因的稳定沉默，该方法具有以下独特的优势：

1. shRNA 为定点整合，非随机整合。

2. shRNA 为稳定遗传，传代过程中，不会丢失。

3. 保证细胞传代过程中，基因的沉默效率保持一致，方便进行科学研究。

我们的优势

1、提供各种实验材料和仪器，满足项目课题实验需要。

2、专业的操作人员。

3、高规格实验室。

4、数据结果交付周期快。

5、完善的服务体系，全程跟进，确保满意。

服务流程

1、提交项目课题相关需求和资料。

2、与我们的专业技术团队讨论项目细节。

3、根据讨论后的意见对实验方案进行修改。

4、双方均满意并达成一致，签订技术服务合同。

5、开展实验，按期完成合同规定的内容。

6、结题，提供实验原始结果和分析结果、实验流程、实验条件等等。

常见问题解答：

Q-1：请问贵公司IOS技术做knock down的优势在哪里？

Q-1：shRNA整合效率高，筛选的阳性株系能够长期稳定遗传，试验周期短，大概为2个月。

Q-2：IOS技术做knock down跟慢病毒方法比有什么优势？

A-2：首先，RNAi的效率要比用慢病毒的方法高，并且能稳定遗传的代数比慢病毒的方法要多，保证最终提供knock down株系，基因效率下调60%以上。

Q-3：shRNA整合到基因组上大概什么位置，能否稳定遗传？

A-3：shRNA整合到目的基因附近，分析目的基因的表达，通过抗性筛选出来的阳性克隆都是可以长期稳定遗传的。

Q-4：IOS技术做基因的RNAi，能应用于植物吗？

Q-4：是可以的，已在烟草、水稻等模式植物中，得到验证。

Q-5：后期筛选鉴定都用什么技术呢？

A-5：我们默认为real time PCR验证，如果客户有需要，我们可以进行WB验证，可以客户提供抗体也可以我们代买抗体。

Q-6：通常构建shRNA载体只构建一条吗？如果shRNA不工作，那重新构建会需要多长时间？

A-6：我们会同时设计合成3条shRNA，对shRNA的RNAi的效果做一个初步的验证，选用RNAi效果最好的一条做稳转株筛选，保证最后能拿到knockdown阳性克隆。

咨询与订购

感谢您选择我们的服务，如果您有任何问题，请联系我们，我们将竭诚为您解答和服务。

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