基因过表达稳定细胞系构建

IOS技术原理介绍

基于Genloci独家专利IOS（Integration Operating System)重组技术，我们可为您提供目的基因的过表达稳定株系构建服务。我们利用IOS技术，将目的基因定点整合到经过筛选验证过的基因组高表达活性位点中， 这些位点不仅安全（无基因），而且基因表达量更高（活跃表达位点），因此可以实现目的基因过表达，并能长期稳定遗传。实验周期短（8-12周），整合效率高。基因整合不限长度，并可同时整合多个基因，实现多基因共表达。

技术原理

实验过程：

实验结果：

实验案例1

1、设计特异性的Oligo。

2、电转定点整合载体（包含RFP基因）、Oligo和RP蛋白至CHO-K1细胞中。

3、Puromycin/G418药杀细胞池，获得稳转细胞池。

4、单克隆生长及Q-PCR验证（图1）。

5、获得RFP蛋白稳定表达的CHO-K1纯克隆（图2）。

图1：Q-PCR检测不同克隆株RFP基因表达情况

图2：IOS技术构建RFP基因稳转株后显微镜观察结果

技术优势

目的基因过表达是研究基因功能常用的手段之一。Genloci拥有的独家IOS专利技术可以快速、高效的将目的基因整合到细胞的基因组中，该方法具有以下独特的优势：

1. 定点整合，非随机整合。

2. 稳定遗传，传代过程中，基因不会丢失。

3. 基因大小不影响整合的效率。

4. 定点整合的位点为高表达位点，基因的表达量高。

我们的优势

1、提供各种实验材料和仪器，满足项目课题实验需要。

2、专业的操作人员。

3、高规格实验室。

4、数据结果交付周期快。

5、完善的服务体系，全程跟进，确保满意。

服务流程

1、提交项目课题相关需求和资料。

2、与我们的专业技术团队讨论项目细节。

3、根据讨论后的意见对实验方案进行修改。

4、双方均满意并达成一致，签订技术服务合同。

5、开展实验，按期完成合同规定的内容。

6、结题，提供实验原始结果和分析结果、实验流程、实验条件等等。

常见问题解答：

Q-1：此基因重组技术的专利是Genloci独家拥有吗？

A-1：Genloci独家拥有 10 项IOS技术专利保护， 由Genloci独家进行商业化开发。

Q-2：IOS 技术构建稳转细胞株相对于其他技术有什么优势？

A-2：IOS 技术不同于传统的任何技术，它是让目的基因定点整合，其它的技术都是随机整合；我们选择的位点是基因组上的高表达位点，所以可确保目的基因的高表达；整合后目的基因是稳定遗传；而其它的技术都是随机整合，且基因不稳定，传代几次后基因会丢失。

Q-3：这个技术做的稳转株能够稳定传代多少代？

A-3：只要细胞本身传代没问题，IOS 技术的稳转株至少可以保证稳定传代 20 代。

Q-4：IOS技术做过表达最低可以保证过表达多少倍？

A-4：Genloci专利的 IOS（Integration Operating System)重组技术可以实现目的基因过表达量最高达上百倍，具体目的基因过表达倍数由目的基因的本底表达量而定，相对于慢病毒包装所能达到的 5 倍左右，非常有优势。

Q-5：可以加标记基因吗？

A-5：可以根据客户的要求在目的基因N端或者 C-端添加各种蛋白标签或者 EGFP 等报告基因，并随目的基因一起稳定遗传，可与目的基因同一个启动子，也可以不同启动子。

Q-6：IOS 技术将目的基因整个到基因组上什么位置，可以是客户指定位置吗？

A-6：目的基因整合的位点是在我们开发 IOS 技术的时候前期筛选到的整合位点，不是随机的，这些位点安全且活跃性高，已经过验证。

Q-7：后期筛选鉴定都用什么技术呢？

A-7：后期单克隆筛选我们默认为 Real-time PCR 验证，如果客户有需要，我们可以进行 WB 验证，可以客户提供抗体也可以我们代买抗体。

Q-8：IOS专利技术是否有相关文献支持？

A-8：IOS技术一直应用于生物制药领域，用于科研方向才刚刚开始，所以暂时没有文章支持，但是，Genloci已经给超过50余位客户提供过过表达细胞株构建的服务。

Q-9：我想请教一下，后期筛选的时候用有限稀释的方法一个 96-孔板大约能有多少个孔是单个细胞？一般您在具体操作过程中一次要做多少块 96-孔板？

A-9：用有限稀释的方法一个 96-孔板大约能有 7-8 个克隆，依细胞性质而定，可以在实验之前先有限稀释摸索一下，这样再做单克隆筛选的时候比较清楚。通常实验一般会做 3-5 块板96-孔板，整合效率低时会多做几块，反之少做几块。

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